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将少数菌落转移到纤维素滤膜上
（1） 在含有选择性的琼脂平板上放一张纤维素滤膜。
（2） 用无菌牙签将各个菌落先转移至滤膜上，再转移至含有选择性但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种（或打点）。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。后，在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒的菌落。
（3） 倒置平板，于37℃培养至划线的细菌菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。
（4） 用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂，在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。
（5） 用Parafilm膜封好主平板，倒置贮放于4℃，直至获得杂交反应的结果。
（6） 裂解细菌，按本段下面所述方法，使释放的DNA结合于纤维素滤膜。
适用场景
1、高灵敏度地检测蛋白-蛋白的交互作用；
2、寻找在蛋白-蛋白交互作用中起关键作用的结构域或活性位点；
3、寻找与靶蛋白相互作用的新蛋白；
4、寻找具有药1物治1疗作用的小分子多肽；
5、寻找调控蛋白质相互作用的化合物；
6、绘制蛋白质相互作用图谱。
酵母双杂交技术的优点
1、无需纯化蛋白；
2、检测在活1细胞内进行，可以在一定程度上代表体内的真实情况；
3、检测的结果是基因表达产物的积累效应，因而可检测存在于蛋白质之间的微弱的或暂时的相互作用；
4、酵母双杂交系统可采用不同组织、器1官、细胞类型和分化时期材料构建cDNA文库，并能分析细胞质、细胞核等多种亚细胞部位的蛋白。
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